根據(jù)染料的激發(fā)和發(fā)射光譜來確定顯微鏡的激發(fā)光是一個(gè)綜合考慮染料光譜特性、顯微鏡光源和參數(shù)設(shè)置的過程。通過合理的選擇和調(diào)整，可以獲得最佳的熒光圖像效果。

一、了解染料的光譜特性

查閱染料的光譜圖：染料的光譜圖通常包含激發(fā)光譜和發(fā)射光譜兩個(gè)曲線。激發(fā)光譜顯示染料在不同波長(zhǎng)光激發(fā)下的吸收能力，而發(fā)射光譜則顯示染料在激發(fā)后發(fā)射熒光的波長(zhǎng)范圍。

確定激發(fā)峰和發(fā)射峰：激發(fā)光譜中的最高吸收峰（Excitation Maximum，簡(jiǎn)稱Ex）是染料對(duì)光吸收最強(qiáng)的波長(zhǎng)，也是選擇激發(fā)光的依據(jù)。發(fā)射光譜中的最高峰（Emission Maximum，簡(jiǎn)稱Em）則是染料發(fā)射熒光最強(qiáng)的波長(zhǎng)。

以上圖片是我司目前能支持的光譜工作波段范圍，定制要考慮不同波段的兼容性，需要根據(jù)客戶具體情況進(jìn)行分析。如有需求請(qǐng)聯(lián)系我們客服人員對(duì)接。

二、選擇顯微鏡的激發(fā)光

匹配激發(fā)峰：根據(jù)染料的激發(fā)峰（Ex）選擇顯微鏡的激發(fā)光波長(zhǎng)。確保所選激發(fā)光波長(zhǎng)與染料的激發(fā)峰相匹配，以獲得最佳的激發(fā)效果。

考慮激發(fā)光的可調(diào)節(jié)性：部分高級(jí)顯微鏡配備有可調(diào)節(jié)的激發(fā)光源，允許用戶根據(jù)染料的激發(fā)光譜微調(diào)激發(fā)光波長(zhǎng)。在這種情況下，可以進(jìn)一步優(yōu)化激發(fā)光波長(zhǎng)，以更好地匹配染料的激發(fā)峰。

避免光譜重疊干擾：在選擇激發(fā)光時(shí)，還需要注意避免與染料發(fā)射光譜或其他可能存在的背景熒光光譜發(fā)生重疊，以減少干擾并提高熒光信號(hào)的準(zhǔn)確性。

U2OS骨肉瘤細(xì)胞熒光觀察

三、調(diào)整顯微鏡參數(shù)

優(yōu)化光路設(shè)置：確保顯微鏡的光路設(shè)置正確，包括反射鏡、濾光片等光學(xué)元件的調(diào)節(jié)，以使激發(fā)光能夠準(zhǔn)確地照射到樣品上，并收集到染料發(fā)射的熒光信號(hào)。

調(diào)整曝光時(shí)間和增益：根據(jù)熒光信號(hào)的強(qiáng)度，調(diào)整顯微鏡的曝光時(shí)間和增益設(shè)置，以獲得最佳的熒光圖像效果。

四、驗(yàn)證和校準(zhǔn)

使用標(biāo)準(zhǔn)樣品驗(yàn)證：在正式實(shí)驗(yàn)前，可以使用已知熒光特性的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行驗(yàn)證，以確保顯微鏡的激發(fā)光和檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)置正確。

定期校準(zhǔn)：為確保顯微鏡的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，建議定期對(duì)顯微鏡進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)。